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赵婷婷 古艳婷 孙斯凡 李平*
（中日友好医院临床医学研究所药物药理室，北京，100029）
摘要 目的：构建人核心蛋白聚糖（decorin，DCN）真核表达载体，并在HEK 293T 细胞中表达，研究其
对微管相关蛋白LC3 和自噬基因Beclinl 的影响。方法：以人胚肺二倍体成纤维细胞（2BS）总RNA 为模
板，采用聚合酶链式反应（PCR）方法扩增获得编码decorin 序列的cDNA 全长，克隆至pUMT 载体并测
序，然后亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His A，酶切鉴定及测序正确后以磷酸钙共沉淀法瞬时转染
HEK 293 细胞，使用RT-PCR、Western Blot 方法检测空载体组和重组质粒转染组对微管相关蛋白LC3 和
自噬基因Beclinl 的转录水平及蛋白水平的表达变化。结果：PCR 扩增获得与预期大小一致、约1000 bp
的特异性DNA 片段；酶切鉴定及测序结果证实，人DCN 基因的cDNA 片段正确插入真核表达载体中。
Western 结果显示磷酸钙共沉淀法转染的HEK 293 细胞中目的基因高表达。PCR 和Western 结果显示，与
空载体组相比，重组质粒转染组能够显著提高Lc3 和Beclin1 的蛋白水平，并显著提高LC3 的转录水平。
结论：成功构建人pcDNA3.1/DCN 的重组质粒，该重组质粒在HEK 293T 中高表达可以显著提高微管相关
蛋白LC3 和自噬基因Beclin l 表达，为进一步研究DCN 与自噬的相互作用奠定基础。
（中日友好医院临床医学研究所药物药理室，北京，100029）
摘要 目的：构建人核心蛋白聚糖（decorin，DCN）真核表达载体，并在HEK 293T 细胞中表达，研究其
对微管相关蛋白LC3 和自噬基因Beclinl 的影响。方法：以人胚肺二倍体成纤维细胞（2BS）总RNA 为模
板，采用聚合酶链式反应（PCR）方法扩增获得编码decorin 序列的cDNA 全长，克隆至pUMT 载体并测
序，然后亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His A，酶切鉴定及测序正确后以磷酸钙共沉淀法瞬时转染
HEK 293 细胞，使用RT-PCR、Western Blot 方法检测空载体组和重组质粒转染组对微管相关蛋白LC3 和
自噬基因Beclinl 的转录水平及蛋白水平的表达变化。结果：PCR 扩增获得与预期大小一致、约1000 bp
的特异性DNA 片段；酶切鉴定及测序结果证实，人DCN 基因的cDNA 片段正确插入真核表达载体中。
Western 结果显示磷酸钙共沉淀法转染的HEK 293 细胞中目的基因高表达。PCR 和Western 结果显示，与
空载体组相比，重组质粒转染组能够显著提高Lc3 和Beclin1 的蛋白水平，并显著提高LC3 的转录水平。
结论：成功构建人pcDNA3.1/DCN 的重组质粒，该重组质粒在HEK 293T 中高表达可以显著提高微管相关
蛋白LC3 和自噬基因Beclin l 表达，为进一步研究DCN 与自噬的相互作用奠定基础。
