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[size=24]清热化滞颗粒促胃肠动力作用机理研究[/size]

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周启鑫

周启鑫
Admin

赵霞 汪受传
(南京中医药大学儿科研究所,江苏南京,210029)
摘要 目的:探讨清热化滞颗粒对胃肠动力的影响。方法:测定实验大鼠胃蛋白酶的活性、胃酸含量;小
鼠小肠推进率、小鼠血浆和小肠组织胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)、生长抑素(SS)和血管活性肠肽(VIP)
的水平。结果:清热化滞颗粒可使胃游离酸和胃总酸分泌量增加;能提高大鼠胃蛋白酶活力并对盐酸阿托
品负荷小鼠小肠推进功能具有促进作用,与空白对照组及药物对照组比较,P<0.01;模型建成后,小鼠血
浆SS 的含量增加,MTL、GAS 含量降低;灌喂清热化滞颗粒后SS 降低,MTL、GAS 增加,且与模型组
比较有显著性差异,P<0.01。结论:清热化滞颗粒治疗小儿积滞化热证的作用机制可能与其通过调节胃肠
激素,促进胃肠蠕动,从而促进胃肠动力有关。
关键词 清热化滞颗粒;积滞化热模型;胃肠激素;胃酸;胃蛋白酶
Research on the Mechanism of Qingrehuazhi Granule on the Gastrointestinal Motility
Zhao Xia Wang Shouchuan
(Pediatric Institute of Nanjing University of Chinese Medicine Nanjing, 210029, China)
ABSTRACT Objective: To probe effect of Qingrehuazhi Granule on the gastrointestinal motility. Methods: By
examining the active of gastric protease and the content of gastric acid in rat, and the driving rat of mice and to
determine the MTL, GAS, SS and VIP of the blood plasma and the small intestinal tissue in the model mice.
Result: Qingrehuazhi Granule increased the total amount of gastric acid and the free acid; and raised the active of
gastric protease; promoted the driving rate of small intestine in the mice with load atropine hydrochloride,
compared with that of normal group and drug control group, (P<0.01). The amount of MTL and GAS in the blood
plasma decreased, and the amount of SS increased after the model was established, but the MTL and GAS
increasing and the SS decreasing after using Qingrehuazhi Granule, and the differences were markedly.
Conclusion: The mechanism of the Granule treating on heat type of children food retention was probably
associated with its regulating of the gastrointestinal hormone and its promoting the gastrointestinal moving.
KEY WORDS Qingrehuazhi Granule; Heat type of model mice with food retention; Gastrointestinal hormone;
Gastric acid; Gastric protease
第九届世界中医药大会
The 9th World Congress of Chinese Medicine
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实 验 研 究
Experimental study
小儿胃肠动力障碍性疾病属小儿脾胃病的范畴,临床常以纳差、恶心、呕吐、嗳气、腹泻、便秘等为
主要临床表现。积滞是小儿胃肠动力障碍性疾病中的常见病。我们在“消积必须导滞,导滞必兼清热”理论
指导下,以化滞清热法治疗小儿积滞化热证,据此立法制成清
热化滞颗粒,主要由酒炒大黄、大青叶、焦麦芽等组成。该药是治疗小儿积滞化热证的有效中成药,
临床研究表明该药对“脘腹胀痛”“食欲下降”“嗳气呕恶”等主要症状体征疗效较好,能显著改善积滞的临床
症状[1]。为探讨其作用机理,我们研究了清热化滞颗粒对胃肠动力的影响。
1 材料
1.1 动物
SD 大鼠,体重180~200g,小鼠 昆明种,体重18~22g,雌雄各半,购于南京中医药大学实验动物
中心。
1.2 饲料
常规饲料由南京中医药大学实验动物中心提供;特制饲料为高蛋白、高热量饲料,由鱼松、豆粉、面
粉、牛奶粉按1:2:1:1 的比例配成,搅拌匀后加水做成饼干,用电热恒温鼓风干燥箱烘干备用。
1.3 药品与试剂
清热化滞颗粒由河北承德中药集团有限责任公司提供,主要成分有大黄(酒炒)、大青叶、焦麦芽等;
规格:2.5g/每袋;批号:2000526。健儿清解液,深圳市中药总厂生产,规格:10mL/支;批号:20010115。
胃动素、胃泌素、生长抑素、血管活性肠肽试剂盒由北京华英生物技术研究所提供。
2 方法
参考文献[2-4]方法。
2.1 对大鼠胃蛋白酶活性和胃酸的影响
取大鼠40 只,随机分为四组,单笼大鼠禁食(不禁水)24h,用20%的乌拉坦麻醉大鼠,剪去腹部的
毛,常规消毒皮肤,于剑突下沿腹白线开一个约长2.5cm 切口,提起胃,在幽门与十二指肠结合部用缝线
结扎。各组分别十二指肠注入生理盐水,健儿清解液和高、低剂量的清热化滞颗粒混悬液,剂量为
1.0mL/100g。缝合创口后放回笼中,术后禁食禁水,5 h 后脱颈椎处死动物,取出胃,收集胃液于刻度离
心管,以3000r/m 离心15 min,吸取上清液进行胃液分析。
取胃液1mL 放入50mL 的三角烧杯中,加0.05mol/L 盐酸溶液15mL,混匀,每只杯中放入蛋白管二
根(取内径1mm 粗细均匀的毛细管,使其用虹吸作用灌满新鲜鸡蛋清,管内无气泡,然后放在85℃热水
皿中使蛋白凝固,待冷后,取出),用脱脂棉塞好瓶口,在37℃恒温培养箱中孵育24h,测量蛋白管两端
透明部分的长度(mm),以四端之值求其平均值,按下式计算胃蛋白酶活性:
胃蛋白酶单位=平均值2×16
取清晰胃液2mL,置于小烧杯中,加入二甲基黄指示剂和酚酞指示剂各3 滴,混匀,呈樱红色,于小
烧杯下衬一白纸,用微量滴定管徐徐滴入0.02mol/L NaOH 标准溶液,随滴随摇,直至樱红色消失,开始
出现橙黄色时,记录NaOH 溶液的消耗量,即为游离酸度终点量,继续用0.02mol/L NaOH 标准溶液滴定,
至出现酚酞的红色(微红色不退),记录NaOH 溶液的消耗量与上所用氢氧化钠量之和即为总酸度终点量,
按下式计算游离酸和总酸度:
游离酸 (mEq/L)=游离酸度终点量×10
总酸度 (mEq/L)=总酸度终点量×10
2.2 对小鼠小肠推进功能的影响
2.2.1 对正常小鼠小肠推进功能的影响 取小鼠40 只,随机分为四组,供水禁食24h,分别灌服
生理盐水、健儿清解液和高、低剂量清热化滞颗粒溶液0.2mL/10g,30 min 后每只小鼠灌服0.2mL 5%炭
末阿拉伯胶混悬液,待20min 后用脱臼法将动物处死。
2.2.2 对盐酸阿托品负荷小鼠小肠推进功能的影响 取小鼠40 只,随机分为四组,供水禁食24h,
在灌药前5 min 皮下注射0.12mg/kg 的盐酸阿托品,然后分别灌服生理盐水,健儿清解液混悬液和高、低
剂量的清热化滞颗粒混悬液0.2mL/10g,30min 后每只小鼠灌服0.2mL 5%炭末阿拉伯胶混悬液,待20min
后用脱臼法将动物处死。
2.2.3 将小鼠脱臼处死后,立即剖腹取出胃肠,平铺于玻璃板上,测量炭末头端在肠管内的移动
距离和小肠全长(自幽门至回盲部),按下式计算推进百分率:
炭末前端至幽门的距离
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实 验 研 究
Experimental study
炭末推进%=─────────────×100%
小肠全长
2.3 对小鼠血浆和肠组织SS、VIP 及MTL、GAS 的含量的影响
将实验动物随机分3 组,即空白对照组20 只(简称空白组)、造模后自然恢复组20 只(简称模型组)、
造模后加清热化滞颗粒组20 只(简称化滞组)。实验时空白组饲喂常规饲料,模型组和化滞组饲喂特制饲
料,均自由摄食和饮水。实验第2 日,模型组和化滞组加喂浓度为25%的牛奶,每次0.7mL,每日3 次,
并腹腔注射盐酸阿托品0.02mg/只(配成0.05mL),每日2 次;空白组加喂等量自来水,并腹腔注射0.05mL
生理盐水。连续3 日,模型造成,第4 日不再给特制饲料,3 组均喂饲常规饲料与自来水。化滞组灌服清
热化滞颗粒25g/kg·d,每日2 次,连续4 天。空白组和模型组加喂等量的自来水。每组在造模前、模型建
成与用药后,分别测试和记录小鼠的体重、腹围及当日内每鼠的平均食量及大便情况。
动物在实验第8 日晚,禁食12h,次日摘取眼球取血后,将静脉血注入10%EDTANa2 30μL 和抑肽酶
30μL 的试管中混匀,4℃离心(1500 r/min)15min,取血浆放-20℃保存备用。检测采用放射免疫非平衡法,
具体严格按试剂盒说明书进行。
3 结果
3.1 清热化滞颗粒对大鼠胃蛋白酶活性和胃酸的影响
高、低剂量清热化滞颗粒及健儿清解液对照组均可使胃游离酸和胃总酸分泌量增加,但无统计学意义。
清热化滞颗粒高、低剂量组及健儿清解液组均具有提高大鼠胃蛋白酶活力的作用,以高剂量组最为明显,
与空白对照组相比,有极显著差异(P<0.01)。并明显优于健儿清解液组(P<0.05)。见表1。
表1 对胃游离胃酸和总酸含量的影响
组 别 剂量 动物数 游离酸量 总酸量 胃蛋白酶活力
(g/kg) (只) (mEq/L) (mEq/L) (u)
生理盐水组 -- 10 78±32.57 123±34.46  198.95±43.36
健儿清解液 6 10 81±37.23 146±41.73  272.34±68.25※
高 剂 量组 8 10 92±34.76 145±31.51  325.27±81.95※※△
低 剂 量组 4 10 89±38.19 132±37.74  269.73±78.36※※
注:与生理盐水组比 ※P<0.05 ※※ P<0.01
与健儿清解液组比 △P<0.05 △△P<0.01
3.2 清热化滞颗粒对盐酸阿托品负荷小鼠小肠推进功能的影响
与生理盐水组相比,清热化滞高、低剂量对盐酸阿托品所致的小鼠推进功能抑制均有极明显的促进
作用(P<0.01),但健儿清解液组则无此作用。清热化滞高、低剂量组与健儿清解液组比较,均有极显著性
差异(P<0.01)。见表2。
表2 对盐酸阿托品负荷小鼠小肠推进功能的影响
组 别 剂 量 动物数 小肠炭末推进率
(g/kg) (只) (%)
生理盐水组 -- 10 65.18±6.90
健儿清解液 6 10 71.76±9.36
高 剂 量组 8 10 85.73±7.64※※△△
低 剂 量组 4 10 81.45±7.85※※△△
注:与生理盐水组比 ※P<0.05 ※※ P<0.01
与健儿清解液组比 △P<0.05 △△P<0.01
3.3 小鼠血浆SS、VIP 及MLT、GAS 的含量变化
模型建成后,小鼠血浆SS 的含量增加,MOT、GAS 含量降低;灌喂清热化滞颗粒后SS 降低,MLT、
GAS 增加,且与模型组比较有显著性差异。结果见表3。
表3 小鼠血浆SS、VIP 及MTL、GAS 的含量变化
组别 动物数 SS(mIU/mL) VIP(mIU/mL) MTL(pg/mL) GAS(pg/mL)
空白组 10 12.53±1.85## 19.73±6.09 198.42±33.71## 28.82±7.82#
模型组 10 23.71±5.82 25.70±13.09 139.48±38.90 20.63±5.64
化滞组 10 17.10±3.56## 21.86±6.42 224.85±25.59## 46.95±4.85##
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Experimental study
注:与模型组比# P<0.05,## P<0.01。
4 讨论
现代医学对胃肠动力障碍性疾病的机理研究较深入,但在治疗上却进展不大,西药促动力药由于明显
的副作用及疗效不肯定,限制了其在临床的应用,尤其是适合小儿的促动力药更是凤毛麟角,而中医药治
疗这一类疾病具有明显的优势。清热化滞颗粒是治疗小儿胃肠动力障碍性疾病的常见病积滞的有效上市中
成药。方中大黄具有泻下攻积,清热泻火之功效;大青叶、北寒水石具有清热泻火的作用,辅佐大黄清热
消积;焦山楂、焦麦芽具有消积和中化滞的功效,辅佐大黄消导积滞;焦槟榔消积行气;草豆范燥湿和中
止呕;全方共奏消积导滞清热之功。积滞与胃肠动力障碍密切相关,胃蛋白酶和胃酸的分泌直接影响胃的
动力,肠蠕动则影响着肠的动力改变;胃肠动力障碍又受胃肠激素的调节。我们研究了其对胃酸、胃蛋白
酶、肠蠕动以及部分胃肠激素的影响。
研究表明,清热化滞颗粒能够有效地增加大鼠胃游离酸及总酸度,提高胃蛋白酶活性,达到促进消化
的目的,可能是其作用机制之一;清热化滞颗粒对小鼠在体小肠推进功能、盐酸阿托品所致的推进抑制均
有极明显的促进作用,说明该药有促进胃肠动力的作用;清热化滞颗粒能提高血和小肠组织中MTL、GAS
含量,降低SS 和小肠组织VIP 的水平,但对血浆VIP 作用不明显,说明该药调节胃肠激素,促进胃肠运
动作用,可能是其内在的作用机制之一。
参考文献
[1] 赵霞,汪受传.清热化滞颗粒治疗小儿积滞化热证211 例临床观察.中医杂志,2003,44(10):758-759
[2] 陈奇. 中药药理研究方法学.北京:人民卫生出版社,1994:73
[3] 朱富华.“食积”动物模型初探[J].陕西中医.1989,10(11):523-524
[4] 李中南,许冠荪,孙子平.健脾和胃饮对食积动物模型的实验研究[J].陕西中医.1996,17(7):330-331

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