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赵坤1 谭润果2
（1.河南中医学院第一附属医院, 河南 郑州 450000；2.郑州市第一人民医院，河南 郑州450004）
摘要 目的：观察哮喘小鼠血清LTC4 的表达及中药速效平喘合剂对其影响。方法：将50 只小鼠随机分为
空白组、模型组、地米组、中药组、中药加地米组。通过腹腔注射卵蛋白并反复雾化吸入建立哮喘小鼠模
型，通过酶联免疫吸附试验检测小鼠血清中LTC4 水平。取小鼠肺组织，观察其肺部病理改变。结果：中
药和激素联合用药在治疗哮喘上优于单独中药，而中药与激素治疗疗效相当。肺组织病理切片显示：空白
组无炎性细胞反应改变，模型组炎性反应明显，余治疗组细胞炎性反应相对较轻。结论：哮喘小鼠血清LTC4
过量表达与哮喘的发生发展密切相关。
关键词 支气管哮喘；白三烯；速效平喘合剂；气道炎症；哮喘模型
支气管哮喘(简称哮喘)是由多种细胞(如__________嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T 淋巴细胞、中性粒细胞、气道上
皮细胞等)和多种细胞组份共同参与的气道慢性炎症性疾患。目前很多研究表明：哮喘是体内多种免疫炎性
细胞及其分泌的炎性介质和各种细胞因子相互作用，导致了IgE 依赖的速发型变态反应和以嗜酸性粒细胞
浸润为主的慢性气道炎症[1]。这些炎症细胞能合成和释放多种炎性介质，其中LTC4 是哮喘发生发展过程中
的主要炎性反应介质之一。本研究旨在深入探讨哮喘炎症发病机制及速效平喘合剂在哮喘治疗上的作用机
理，为其在治疗哮喘方面提供理论依据，提高哮喘患者的生活质量。
1 实验材料
1.1 动物 健康km 小鼠，体重20±3g，月龄6－8 周，雄性，普通级，50 只，由河南省实验动物中心
提供。
1.2 主要实验药品 速效平喘合剂：配方用颗粒剂，主要成分为炙麻黄、生白芍、细辛、桑白皮、葶
苈子、白芥子、苏子、炒卜子、地龙、款冬花、甘草等，由江阴市天江药业生产，购于河南中医学院第一附属
医院中药颗粒房。地塞米松注射液：上海旭普药业公司生产。卵白蛋白(Ovalhumin，OVA)：美国Sigma 公司(分
装)生产。氢氧化铝干粉：上海顺强生物科技有限公司生产。
1.3 主要实验仪器 雾化吸入器：北京亚都有限公司；电热恒温水浴箱(20-40℃)：北京市医疗设备厂；
各式可调移液器(0.5-10μl，20-50μl，50-100μl)；酶标仪：日本，型号：BRO RAD680； PM-10AD 光学显
微镜：Olympus optical Co. LTD，JAPAN；LEICARM2245 型石蜡切片机：德国LEICA 公司；LEICADM5500B
2 实验方法
2.1 分组 将50 只km 小鼠随机分为五组，每组10 只。即A 组：空白对照组；B 组：哮喘模型组；C
组：地塞米松干预组；D 组：中药（速效平喘合剂）干预组 ；E 组：联合用药（速效平喘合剂+地塞米松）
第九届世界中医药大会
The 9th World Congress of Chinese Medicine
·243·
实 验 研 究
Experimental study
干预组。
2.2 哮喘小鼠模型的制作 采用卵蛋白致敏和激发的方法建立哮喘小鼠模型。实验第1 天B 组、C
组、D 组、E 组小鼠均以新鲜配制的OVA 溶液腹腔内注射，每鼠0.2ml（含100ugOVA 和2mg 氢
氧化铝），l 周后重复一次。实验第15 天起将B 组至E 组小鼠置于透明密闭有机玻璃染毒柜内，给
予2%卵蛋白溶液（OVA 溶于生理盐水）2ml 雾化吸入以激发哮喘，每次30 分钟，每天一次，连
续2 周。A 组以等量0.9％生理盐水代替OVA 进行腹腔注射和雾化，造模方法同其他组。同时观察
并记录小鼠呼吸及全身情况，以出现呼吸增快、喷嚏揉鼻、口周发绀、腹肌痉挛、点头呼吸等症状
为激发成功。
2.3 药物干预 空白对照组（A 组）：实验第15 天开始用生理盐水雾化吸入。药物干预组（C、D、E
组）：实验第1，8 天，各组小鼠均给予腹腔注射卵蛋白致敏，实验第15 天予以卵蛋白雾化吸入激发哮喘，
致敏激发的药物和方法同B 组；各组于激发前30 分钟药物干预，分别如下：C 组：地塞米松5mg/kg（约
相当于人体剂量0.5mg/kg）腹腔注射；D 组：每天灌服速效平喘合剂（含生药量1g/ml），按正常人体剂量
0.0026[3]折算，每天1 次，1 次15g/kg，连续14d；E 组：给予中药灌胃，每天1 次，1 次15g/kg，同时腹
腔注射地塞米松5mg/kg，连续14d。（具体用药剂量按照贺石林主编《实验动物和动物实验技术》提供的
常用动物与人的不同体重的药物换算公式计算：D2=D1×K2/K1，其中D2 为所求剂量，D1 为已知剂量， K1、
K2 的值均可查表获得）。
2.4 小鼠血液采集 腹腔注射戊巴比妥钠麻醉动物，摘取眼球取血，1ml/只，直接离心，采用双抗体
夹心ABC-ELISA 法测定小鼠血清LTC4 的水平。取小鼠右肺中叶组织，将肺组织块脱水、透明、浸蜡、包
埋、切片、裱片、烤片、HE 染色。光镜下观察一般的病理组织学变化并进行显微摄影。
3 统计方法
数据均用SPSS17.0 统计分析软件分析结果。计量资料采用均数±标准差( x ±s)表示，组间比较采用t
检验，多组比较采用单因素方差分析。
4 结果
4.1 各组小鼠血清LTC4 水平 见表1。
表1 各组小鼠血清LTC4 水平( x ±s)
组别 例数 （ng/l）
空白对照组
哮喘模型组
地米治疗组
中药治疗组
联合用药组
10
10
10
10
10
20.072±2.282
43.487±3.467◆
25.659±2.237●*
26.536±1.457●
22.419±1.255●☆
注：与空白对照组比较，◆ P＜0.01;与哮喘模型组比较，● P＜0.01;与中药治疗组、地米治疗组比较，☆P
＜0.01;与中药组比较，* P>0.05。
4.2 病理切片 见图1~图5。
图1 空白组 HE×100 图2 哮喘模型组 HE×100 图3 地塞米松治疗组HE×100
图4中药治疗组HE×100 图5联合用药组HE×100
第九届世界中医药大会
The 9th World Congress of Chinese Medicine
·24 4·
实 验 研 究
Experimental study
5 讨论
哮喘发病环节中，气道慢性炎症是基本病理变化。在炎性细胞活化浸润、炎症介质的释放、气道内皮
的损伤等一系列过程中，炎性细胞的募集并迁移至炎症部位是首要关键步骤。其中LTC4 为哮喘发病机制
中的重要炎症因子之一。LTC4 能促进人的气道结构细胞如支气管平滑肌细胞的有丝分裂，促进杯状细胞增
生、胶原沉积、上皮下层纤维化，从而促进慢性哮喘患者的气道重塑。LTC4 能上调呼吸道上皮细胞和呼吸
道平滑肌细胞内皮素-1(ET-1)mRNA 的表达并刺激ET-1 释放，而ET-1 是迄今所知最强大的支气管平滑肌
收缩剂。LTC4 可通过诱导白细胞和内皮细胞表面表达P-选择素而引起PMN 沿着血管内皮移动，嗜酸粒细
胞特异P-选择素配体的过度表达，可促进选择性的嗜酸性粒细胞与中性粒细胞的粘附。这种促进炎症细胞
的迁徙和聚集的作用又可以产生LTC4，这可能是促使更多炎症细胞进入气道，使炎症进一步放大而形成恶
性循环的基础。Wang J [2]等研究发现LTC4 诱导的氧化应激加重气道炎症。殷佩玲[3]等通过对哮喘儿童研究
表明：轻、中、重度哮喘患儿血液LTC4 水平逐渐升高，均显著高于对照组(P <0.01)。刘玉春等[4]研究结果
表明，无论是发作期还是缓解期哮喘患者，血清中LTC4 水平均高于正常组，LTC4 参与了气道过敏性炎症
反应，又是哮喘气道重塑过程中的重要因子。
本实验通过双抗体夹心ELISA 方法来测定哮喘小鼠血清LTC4 表达情况。结果显示正常小鼠血清LTC4
有少量表达，从本实验结果中可以观察到，与哮喘模型组比较，中药治疗组、地米治疗组、联合用药组可
明显降低小鼠血清LTC4 水平，具有非常显著性差异（P＜0.01）；联合用药组在降低小鼠血清LTC4 水平上
与激素地米组及中药治疗组比较具有非常显著性差异（P＜0.01）；地米治疗组、中药组在抑制小鼠血清LTC4
水平上无显著差异，（P＞0.05）。因此，推测速效平喘合剂抑制哮喘发生可能有部分是通过抑制血清LTC4
过度表达而实现的。
本实验的病理学改变显示：哮喘小鼠气道壁内可见明显的EOS、淋巴细胞和中性粒细胞等炎性细胞的
浸润，黏膜皱襞加深，上皮细胞不同程度坏死脱落；哮喘小鼠经速效平喘合剂干预后，炎性细胞对气道管
壁的浸润明显减轻。
通过本实验结果显示速效平喘合剂在降低LTC4 的表达方面作用显著。中药在干预哮喘小鼠模型中与
全量地塞米松相比无显著差异，提示速效平喘合剂在哮喘治疗中至少可以替代激素的部分作用，从而减少
了激素治疗所带来的一系列副作用。但本实验结论尚需反复实验研究及更多的临床观察研究支持。
参考文献
[1] 商艳,等.国外医学呼吸系统分册[J].2004,24:7-9.
[2] Wang J,Mochizuki H,Todokoro M,et a1.Does leukotriene afect intracel lular glutathione redox state in cultured human airway epithelial ccUs [J].Antioxid
Redox Signal,2008,10(4):821-828.
[3] 殷佩玲,吴升华.支气管哮喘患儿血液脂氧素A4 与白三烯C4 水平的变化[J].江苏医药,2008,34(
:790-791.
[4] 刘玉春,徐继庆,董惠翔,等.哮喘患者外周血白三烯C4 水平的临床意义[J].临床和实验医学杂志,2007,6(6):76-77.
（1.河南中医学院第一附属医院, 河南 郑州 450000；2.郑州市第一人民医院，河南 郑州450004）
摘要 目的：观察哮喘小鼠血清LTC4 的表达及中药速效平喘合剂对其影响。方法：将50 只小鼠随机分为
空白组、模型组、地米组、中药组、中药加地米组。通过腹腔注射卵蛋白并反复雾化吸入建立哮喘小鼠模
型，通过酶联免疫吸附试验检测小鼠血清中LTC4 水平。取小鼠肺组织，观察其肺部病理改变。结果：中
药和激素联合用药在治疗哮喘上优于单独中药，而中药与激素治疗疗效相当。肺组织病理切片显示：空白
组无炎性细胞反应改变，模型组炎性反应明显，余治疗组细胞炎性反应相对较轻。结论：哮喘小鼠血清LTC4
过量表达与哮喘的发生发展密切相关。
关键词 支气管哮喘；白三烯；速效平喘合剂；气道炎症；哮喘模型
支气管哮喘(简称哮喘)是由多种细胞(如__________嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T 淋巴细胞、中性粒细胞、气道上
皮细胞等)和多种细胞组份共同参与的气道慢性炎症性疾患。目前很多研究表明：哮喘是体内多种免疫炎性
细胞及其分泌的炎性介质和各种细胞因子相互作用，导致了IgE 依赖的速发型变态反应和以嗜酸性粒细胞
浸润为主的慢性气道炎症[1]。这些炎症细胞能合成和释放多种炎性介质，其中LTC4 是哮喘发生发展过程中
的主要炎性反应介质之一。本研究旨在深入探讨哮喘炎症发病机制及速效平喘合剂在哮喘治疗上的作用机
理，为其在治疗哮喘方面提供理论依据，提高哮喘患者的生活质量。
1 实验材料
1.1 动物 健康km 小鼠，体重20±3g，月龄6－8 周，雄性，普通级，50 只，由河南省实验动物中心
提供。
1.2 主要实验药品 速效平喘合剂：配方用颗粒剂，主要成分为炙麻黄、生白芍、细辛、桑白皮、葶
苈子、白芥子、苏子、炒卜子、地龙、款冬花、甘草等，由江阴市天江药业生产，购于河南中医学院第一附属
医院中药颗粒房。地塞米松注射液：上海旭普药业公司生产。卵白蛋白(Ovalhumin，OVA)：美国Sigma 公司(分
装)生产。氢氧化铝干粉：上海顺强生物科技有限公司生产。
1.3 主要实验仪器 雾化吸入器：北京亚都有限公司；电热恒温水浴箱(20-40℃)：北京市医疗设备厂；
各式可调移液器(0.5-10μl，20-50μl，50-100μl)；酶标仪：日本，型号：BRO RAD680； PM-10AD 光学显
微镜：Olympus optical Co. LTD，JAPAN；LEICARM2245 型石蜡切片机：德国LEICA 公司；LEICADM5500B
2 实验方法
2.1 分组 将50 只km 小鼠随机分为五组，每组10 只。即A 组：空白对照组；B 组：哮喘模型组；C
组：地塞米松干预组；D 组：中药（速效平喘合剂）干预组 ；E 组：联合用药（速效平喘合剂+地塞米松）
第九届世界中医药大会
The 9th World Congress of Chinese Medicine
·243·
实 验 研 究
Experimental study
干预组。
2.2 哮喘小鼠模型的制作 采用卵蛋白致敏和激发的方法建立哮喘小鼠模型。实验第1 天B 组、C
组、D 组、E 组小鼠均以新鲜配制的OVA 溶液腹腔内注射，每鼠0.2ml（含100ugOVA 和2mg 氢
氧化铝），l 周后重复一次。实验第15 天起将B 组至E 组小鼠置于透明密闭有机玻璃染毒柜内，给
予2%卵蛋白溶液（OVA 溶于生理盐水）2ml 雾化吸入以激发哮喘，每次30 分钟，每天一次，连
续2 周。A 组以等量0.9％生理盐水代替OVA 进行腹腔注射和雾化，造模方法同其他组。同时观察
并记录小鼠呼吸及全身情况，以出现呼吸增快、喷嚏揉鼻、口周发绀、腹肌痉挛、点头呼吸等症状
为激发成功。
2.3 药物干预 空白对照组（A 组）：实验第15 天开始用生理盐水雾化吸入。药物干预组（C、D、E
组）：实验第1，8 天，各组小鼠均给予腹腔注射卵蛋白致敏，实验第15 天予以卵蛋白雾化吸入激发哮喘，
致敏激发的药物和方法同B 组；各组于激发前30 分钟药物干预，分别如下：C 组：地塞米松5mg/kg（约
相当于人体剂量0.5mg/kg）腹腔注射；D 组：每天灌服速效平喘合剂（含生药量1g/ml），按正常人体剂量
0.0026[3]折算，每天1 次，1 次15g/kg，连续14d；E 组：给予中药灌胃，每天1 次，1 次15g/kg，同时腹
腔注射地塞米松5mg/kg，连续14d。（具体用药剂量按照贺石林主编《实验动物和动物实验技术》提供的
常用动物与人的不同体重的药物换算公式计算：D2=D1×K2/K1，其中D2 为所求剂量，D1 为已知剂量， K1、
K2 的值均可查表获得）。
2.4 小鼠血液采集 腹腔注射戊巴比妥钠麻醉动物，摘取眼球取血，1ml/只，直接离心，采用双抗体
夹心ABC-ELISA 法测定小鼠血清LTC4 的水平。取小鼠右肺中叶组织，将肺组织块脱水、透明、浸蜡、包
埋、切片、裱片、烤片、HE 染色。光镜下观察一般的病理组织学变化并进行显微摄影。
3 统计方法
数据均用SPSS17.0 统计分析软件分析结果。计量资料采用均数±标准差( x ±s)表示，组间比较采用t
检验，多组比较采用单因素方差分析。
4 结果
4.1 各组小鼠血清LTC4 水平 见表1。
表1 各组小鼠血清LTC4 水平( x ±s)
组别 例数 （ng/l）
空白对照组
哮喘模型组
地米治疗组
中药治疗组
联合用药组
10
10
10
10
10
20.072±2.282
43.487±3.467◆
25.659±2.237●*
26.536±1.457●
22.419±1.255●☆
注：与空白对照组比较，◆ P＜0.01;与哮喘模型组比较，● P＜0.01;与中药治疗组、地米治疗组比较，☆P
＜0.01;与中药组比较，* P>0.05。
4.2 病理切片 见图1~图5。
图1 空白组 HE×100 图2 哮喘模型组 HE×100 图3 地塞米松治疗组HE×100
图4中药治疗组HE×100 图5联合用药组HE×100
第九届世界中医药大会
The 9th World Congress of Chinese Medicine
·24 4·
实 验 研 究
Experimental study
5 讨论
哮喘发病环节中，气道慢性炎症是基本病理变化。在炎性细胞活化浸润、炎症介质的释放、气道内皮
的损伤等一系列过程中，炎性细胞的募集并迁移至炎症部位是首要关键步骤。其中LTC4 为哮喘发病机制
中的重要炎症因子之一。LTC4 能促进人的气道结构细胞如支气管平滑肌细胞的有丝分裂，促进杯状细胞增
生、胶原沉积、上皮下层纤维化，从而促进慢性哮喘患者的气道重塑。LTC4 能上调呼吸道上皮细胞和呼吸
道平滑肌细胞内皮素-1(ET-1)mRNA 的表达并刺激ET-1 释放，而ET-1 是迄今所知最强大的支气管平滑肌
收缩剂。LTC4 可通过诱导白细胞和内皮细胞表面表达P-选择素而引起PMN 沿着血管内皮移动，嗜酸粒细
胞特异P-选择素配体的过度表达，可促进选择性的嗜酸性粒细胞与中性粒细胞的粘附。这种促进炎症细胞
的迁徙和聚集的作用又可以产生LTC4，这可能是促使更多炎症细胞进入气道，使炎症进一步放大而形成恶
性循环的基础。Wang J [2]等研究发现LTC4 诱导的氧化应激加重气道炎症。殷佩玲[3]等通过对哮喘儿童研究
表明：轻、中、重度哮喘患儿血液LTC4 水平逐渐升高，均显著高于对照组(P <0.01)。刘玉春等[4]研究结果
表明，无论是发作期还是缓解期哮喘患者，血清中LTC4 水平均高于正常组，LTC4 参与了气道过敏性炎症
反应，又是哮喘气道重塑过程中的重要因子。
本实验通过双抗体夹心ELISA 方法来测定哮喘小鼠血清LTC4 表达情况。结果显示正常小鼠血清LTC4
有少量表达，从本实验结果中可以观察到，与哮喘模型组比较，中药治疗组、地米治疗组、联合用药组可
明显降低小鼠血清LTC4 水平，具有非常显著性差异（P＜0.01）；联合用药组在降低小鼠血清LTC4 水平上
与激素地米组及中药治疗组比较具有非常显著性差异（P＜0.01）；地米治疗组、中药组在抑制小鼠血清LTC4
水平上无显著差异，（P＞0.05）。因此，推测速效平喘合剂抑制哮喘发生可能有部分是通过抑制血清LTC4
过度表达而实现的。
本实验的病理学改变显示：哮喘小鼠气道壁内可见明显的EOS、淋巴细胞和中性粒细胞等炎性细胞的
浸润，黏膜皱襞加深，上皮细胞不同程度坏死脱落；哮喘小鼠经速效平喘合剂干预后，炎性细胞对气道管
壁的浸润明显减轻。
通过本实验结果显示速效平喘合剂在降低LTC4 的表达方面作用显著。中药在干预哮喘小鼠模型中与
全量地塞米松相比无显著差异，提示速效平喘合剂在哮喘治疗中至少可以替代激素的部分作用，从而减少
了激素治疗所带来的一系列副作用。但本实验结论尚需反复实验研究及更多的临床观察研究支持。
参考文献
[1] 商艳,等.国外医学呼吸系统分册[J].2004,24:7-9.
[2] Wang J,Mochizuki H,Todokoro M,et a1.Does leukotriene afect intracel lular glutathione redox state in cultured human airway epithelial ccUs [J].Antioxid
Redox Signal,2008,10(4):821-828.
[3] 殷佩玲,吴升华.支气管哮喘患儿血液脂氧素A4 与白三烯C4 水平的变化[J].江苏医药,2008,34(
:790-791.[4] 刘玉春,徐继庆,董惠翔,等.哮喘患者外周血白三烯C4 水平的临床意义[J].临床和实验医学杂志,2007,6(6):76-77.
